产品介绍

Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的专业工具。细胞活力可通过多种参数进行评估，本试剂盒通过检测磷脂酰丝氨酸（PS）外翻现象特异性监测细胞凋亡过程。在凋亡发生时，PS会从细胞膜内侧转移至外侧，其细胞表面暴露可作为凋亡早期/中期的普适性标志物，且该检测信号早于细胞形态学变化出现。

Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒采用专利小分子Apopxin™ PS探针，该绿色荧光染料可被405 nm紫激光有效激发，并在~520 nm处发射强绿色荧光。本产品经过专门优化，适用于配备紫激光（Violet Laser）的流式细胞仪，特别适合用于细胞多色流式分析。

由于其大斯托克斯位移（Stokes Shift）及显著提升的PS亲和力，本试剂盒相比仅适用于显微镜或流式平台的常规膜联蛋白V凋亡检测产品具有更强稳定性，也可用于荧光酶标仪检测平台。

样品实验方案

简要概述

1.制备含测试化合物的细胞样本（200 µL/样本）

2.加入Apopxin Violet 500检测溶液

3.室温避光孵育30-60分钟

4.使用配备520/40 nm滤光片（AmCyan通道）的流式细胞仪或 Violet滤光片的荧光显微镜分析细胞。

重要提示：实验前需将100X碘化丙啶（组分C）于室温解冻。

实验操作流程

1.使用测试化合物处理细胞（如：Jurkat细胞用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

注意：贴壁细胞因收获过程可能损伤膜结构，常规不建议流式检测。但Casiola-Rosen和van Engelend等已建立相关方法

2.离心收集细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μLApopxin  Violet 450（组分A）加入细胞中。

（可选步骤）加入2 µL 100X碘化丙啶（组分C）标记坏死细胞。

5.室温避光孵育30至60分钟。

可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

6.使用配备520/40 nm滤光片（AmCyan通道）的流式细胞仪的流式细胞仪或 Violet滤光片的荧光显微镜分析细胞。

流式细胞仪分析方案

凋亡检测

使用配备520/40 nm滤光片（AmCyan通道）的流式细胞仪定量Apopxin™ Violet 500结合情况

细胞活力检测

添加碘化丙啶后通过610/20 nm滤光片（PE-Texas Red通道）分析

注：贴壁细胞因收获过程可能损伤膜结构，常规不建议流式检测。但Casiola-Rosen等学者已建立相关方法

荧光显微镜分析方案

1.吸取孵育后的细胞悬液，用检测缓冲液洗涤1-2次，随后用检测缓冲液重新悬浮细胞。

2.将细胞悬液加至带有盖玻片的载玻片上。
*注：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上培养。完成Apopxin™ Violet 500孵育后，用检测缓冲液洗涤1-2次，重新加入检测缓冲液覆盖盖玻片，倒置后观察。也可选择用2%甲醛固定细胞后镜检。*

3.使用紫光滤光片（Violet filter）观察Apopxin™ Violet 500标记的凋亡细胞。

当加入碘化丙啶时，通过TRITC滤光片检测细胞活性。细胞膜表面的蓝色荧光表明Apopxin™ Violet 500与细胞表面PS的结合。

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！